ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。
操作步驟
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
加 樣
1. 血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2. 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。
3. 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
標本為血清：
好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
1. 加樣后及時放入孵箱。
2. 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
3. 如果采用AT或其他全自動加樣，好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
4. 標本較多時，請分批操作。
洗 板
1. 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2. 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹di；洗板針堵塞，抽吸不wan全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3. 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
1. 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干。
2. 合理安排，或多用幾臺洗板機。
顯 色
1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2. 加樣時保持顯色劑不外流；
3. A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。讀板時板底不清潔。應(yīng)保證酶標板清潔。
全過程
1. 整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。
2. 實現(xiàn)ELISA試劑盒檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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